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总RNA的提取( Trizol 法提取 )

宣布者:艾美捷科技    宣布时候:2021-06-08     
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在搜(sou)集(ji)到生物资料以后,最好能马上停(ting)止 RNA 制备(bei)任(ren)务。若需(xu)临时贮(zhu)存,则应以液(ye)氮将生物资料缓慢冷冻(dong)(dong)后,贮(zhu)存于-80℃冷冻(dong)(dong)柜。在制备(bei) RNA 时,将贮(zhu)存于冷冻(dong)(dong)柜的资料掏(tao)出,当即以插(cha)手液(ye)氮研磨(mo)的体例(li)突(tu)破细(xi)胞,不能够先(xian)行冻(dong)(dong)结 ,以防止 RNase 的感化。


1.提取(qu)构(gou)(gou)造(zao) RNA 时,每50~100mg 构(gou)(gou)造(zao)用(yong) 1ml Trizol 试剂对构(gou)(gou)造(zao)停(ting)止裂(lie)解;提取(qu)细胞 RNA 时,先离(li)心积淀细胞,每 5-10 ╳106 个细胞加 1ml Trizol 后,频频用(yong)枪奏(zou)乐或猛烈振荡以裂(lie)解细胞;


       2.将上述构造或细胞的Trizol 裂解液转入EP管中,在室温15~30C下安排 5 分钟 ;


3. 在上述 EP 管中,根据每 1ml TRIZOL 加 0.2ml 氯仿的量插手氯仿,盖上 EP管盖子,在手顶用力震动 15 秒,在室温下(15℃~30℃)安排 2~3 分钟后,
12000g(2℃~8℃)离心 15 分钟;


4. 取下层水相置于新 EP管中,根据每(mei) 1ml TRIZOL加 0.5ml 异丙醇的量(liang)插手(shou)异丙醇,在室温下(15℃~30℃)安排 10 分钟(zhong),12000g(2℃~8℃)离心 10 分钟(zhong) ;


5.弃(qi)(qi)上清(qing) ,根(gen)据每(mei) 1ml TRIZOL 加 1ml 75%乙醇进 行洗濯(zhuo),涡(wo) 旋(xuan)夹杂,7500g(2℃~8℃)离心 5 分(fen)钟,弃(qi)(qi)上清(qing);


6. 让积淀的 RNA 在室温下(xia)天然枯燥;


7.用 Rnase-free water 消融(rong) RNA 积淀(dian)。



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