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Jackson SRM利用荧光标记二抗

宣布者:艾美捷科技    宣布时候:2020-12-31     
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       艾美捷科技作为Jackson中国地域总代办署理,将为您供给Jackson的特点优良产物首要包含各类纯化的二抗、标记的二抗(AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、长臂生物素、辣根酶和碱磷酶标记)、胶体金试剂等。明天首要为您先容SRM利用荧光标记二抗,看下文先容:

      现在,迷信家们已研发了多种超分辩率手艺,远远超越了衍射极限,能够或许察看到份子规范的细节。SRM手艺能够将细胞布局剖析为亚细胞程度,从而取得有关细胞组分的3D布局的信息,并能够察看到单份子共定位。上面咱们来扼要概述了时下几种最风行的SRM手艺的道理:

       1.受激起射耗竭(STED)显微镜

      STED对有经历的荧鲜明微镜利用者来讲绝对简略,该体例和通俗共聚焦显微镜(Confocal)的道理不异。通俗Confocal利用单光源,而STED利用双光源。此中一个光源发射能激起荧光团——荧光标签(研讨者们以此来定位和察看卵白)的光,另外一个光源收回不同波长的光,用于按捺荧光。这束光是环形的,并且与第一束光有所堆叠,是以只要环形中间地域的份子会持续收回荧光。

取(qu)得STED超分辩率(lv)图片并不(bu)那末(mo)庞杂,用户(hu)须要细心(xin)调剂参(can)数(shu),能(neng)力取(qu)得标致(zhi)的成(cheng)果,不(bu)然(ran)所得图片和(he)通俗confocal不(bu)不(bu)同。


STED.jpg


      利用传统和RESCue受激起射减损显微镜(STED)取得的细胞核膜上核孔复合体的图片。

       STED的道理:

      显微镜透镜对光的衍射会致使来自单个点的光呈现在较大的地域,这称为点分离函数(PSF)(见图1),因为PSF的存在,使得惯例显微镜没法到达超分辩。


PSF.png

       图1:在通俗光学显微镜中,成像是经由进程未来自点光源的光芒集聚到像立体上的单个点来完成的。超越光衍射的限定,避免了射线的切确集聚,从而致使物体的图象恍惚。显微镜的分辩率取决于点分离函数(PSF)的巨细,或工具在某个点的三维强度散布。在STED中,利用环形炸弹耗尽型激光器,其零点与激起激光核心的最大值堆叠。STED激光器引发荧光的“饱和耗尽”,从而“按捺了来自零点四周地域的荧光,致使有用PSF的尺寸减小”。

      而受激起射耗竭(STED)显微镜经由进程限定样品的荧光地域(PSF)发生超分辩率图象。STED显微镜利用两个堆叠的激光,第一个根据惯例显微镜激起荧光团(图2A)。第二个激光器称为耗尽激光器(STED激光器),它激起“甜甜圈”外形的激光,此中间的零强度点很是小(?30 nm)(未激起)。除在甜甜圈的中间处以外,第二激光起到了“封锁”第一激光所发生的外圈荧光,从而将样本激起的荧光份子规模减少到中间圆点处,这有用地下降了PSF,以发生很是小的单份子荧光聚焦地域,从而取得高分辩率图象(图2D)。


PSF-1.jpg

       图2

      1.单个小于250 nm的卵白质没法经由进程规范共聚焦成像剖析,从而致使图象恍惚

      2.STED耗尽激光器发生了淬灭核心荧光的“甜甜圈”

      3.饱和耗尽在功效上下降了鼓励PSF

      4.随之能够剖析单个卵白质

       合用于STED的荧光团偶联抗体:

      为了取得超分辩率,染料必须具备STED激光波长的多发射截面,并有用地完成高饱和度。这类激烈的照明白保了一切被STED激光“封锁”的份子都受受激起射的安排。适合的染料应具备低的光漂白性,具备高的量子产率和对照度,并在方针四周具备充足的标记密度。

      Jackson供给荧光染料标记的二抗,以下染料标记的二抗已被考证在STED中胜利利用:


染料货号
AlexaFluor®488115-545-003
FITC715-095-150
AlexaFluor®594715-585-151
AlexaFluor®647 

     

        2. 随机光学重修显微镜(STORM)

      最着名的“基于探针”的手艺是Betzig等人研发的光激活定位显微手艺(photoactivated localization microscopy, PALM)和哈佛大学庄小威尝试室发现的随机光学重修显微手艺(stochastic optical reconstruction microscopy, STORM)。最初一切的荧光标签都是暗的。而后利用激光脉冲来激活一小局部荧光标签,随后利用另外一束光来封锁这些荧光标签。不时反复这个进程,天生一系列局部荧光图,最初重修成全部视线的荧光图。,以发生分辩率优于惯例体例搜集的图象。


STORM.jpg


      利用超分辩率随机光学重修显微镜(stochastic optical reconstruction microscopy,STORM),迷信家初次察看到了神经元轴突的细胞骨架。

      Jackson供给合用于dSTORM利用的标记二抗,简而言之,较低强度的激起光激起样品,随机激活少许染料份子。单个发荧光的染料份子充足分离,是以能够计较其点分离函数的中间,从而揣度出染料简直切地位。而后利用第二激光封锁一切份子,并反复该进程。而后,经由进程堆叠每种染料的一切映照点扩大函数,以数学体例天生高分辩率图象。

       用于单份子定位尝试的荧光团偶联抗体

 用于(yu)单(dan)份子(zi)定位(wei)的(de)最好(hao)染(ran)料凡是(shi)(shi)很是(shi)(shi)亮,并发生(sheng)充足的(de)光子(zi)以(yi)靠得住地发生(sheng)慎密的(de)高斯散布。Jackson ImmunoResearch供给了多种(zhong)广谱规模内的(de)靠得住染(ran)料,比方AlexaFluor®488,AlexaFluor®647和Cy™5,可(ke)用于(yu)这些范例的(de)尝(chang)试。

       倡议用于超分辩率显微镜的荧光染料偶联物:


STED激起波长(nm)发射波长(nm)
Alexa Fluor® 488493519
荧光素 / FITC492520
Alexa Fluor® 594591614
Alexa Fluor® 647651667

 

STORM激起波长(nm)发射波长(nm)
Alexa Fluor® 488493519
Alexa Fluor® 647651667
Cy™5650670

      每种SRM手艺都有各自的探针挑选请求,Jackson ImmunoResearch供给多种已知在SRM利用中表现杰出的荧光标记二抗。应当注重的是,SRM范畴变更敏捷,是以,倡议从专业手艺文献中追求信息,以赞助挑选适合的荧光团。

      更多相干Jackson ImmmoResecarch品牌的SRM利用荧光标记二抗产物概况,接待点击检查:超分辩(bian)率显微(wei)镜阐发,荧光抗体该怎样选(xuan)?

      作为Jackson ImmmoResecarch在中国的地域代办署理,艾美捷科技无限公司将为中国客户供给最周全的ackson ImmmoResecarch品牌的SRM利用荧光标记二抗产物和订制办事,接待随时接洽咱们。


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